Kit ELISA adalah berdasarkan fasa pepejal antigen atau antibodi dan pelabelan enzim antigen atau antibodi. Antigen atau antibodi yang terikat pada permukaan pembawa pepejal masih mengekalkan aktiviti imunologinya, dan enzim berlabel antigen atau antibodi mengekalkan kedua-dua aktiviti imunologi dan aktiviti enzim. Pada masa penentuan, spesimen yang diuji (di mana antibodi atau antigen diukur) bertindak balas dengan antigen atau antibodi pada permukaan pembawa pepejal. Kompleks antigen-antibodi yang terbentuk pada pembawa pepejal dipisahkan daripada bahan lain dalam cecair dengan mencuci.
Antigen atau antibodi berlabel enzim ditambah, yang juga mengikat kepada pembawa pepejal melalui tindak balas. Pada masa ini, jumlah enzim dalam fasa pepejal adalah berkadaran dengan jumlah bahan dalam spesimen. Selepas menambah substrat tindak balas enzim, substrat dimangkinkan oleh enzim untuk menjadi produk berwarna. Jumlah produk secara langsung berkaitan dengan jumlah bahan yang diuji dalam spesimen, jadi analisis kualitatif atau kuantitatif boleh dijalankan mengikut kedalaman warna.
Kecekapan pemangkin enzim yang tinggi secara tidak langsung menguatkan hasil tindak balas imun, menjadikan ujian sangat sensitif. ELISA boleh digunakan untuk menentukan antigen, tetapi juga boleh digunakan untuk menentukan antibodi.
Prinsip asas kit ELISA
Ia menggunakan tindak balas khusus antigen dan antibodi untuk menyambungkan objek kepada enzim, dan kemudian menghasilkan tindak balas warna antara enzim dan substrat untuk penentuan kuantitatif. Objek pengukuran boleh menjadi antibodi atau antigen.
Terdapat tiga reagen yang diperlukan dalam kaedah penentuan ini:
â Antigen fasa pepejal atau antibodi (penjerap imun)
â¡ Enzim berlabel antigen atau antibodi (penanda)
⢠substrat untuk tindakan enzim (agen pembangunan warna)
Dalam pengukuran, antigen (antibodi) mula-mula terikat pada pembawa pepejal, tetapi masih mengekalkan aktiviti imunnya, dan kemudian konjugat (penanda) antibodi (antigen) dan enzim ditambah, yang masih mengekalkan aktiviti imun dan enzim asalnya. aktiviti. Apabila konjugat bertindak balas dengan antigen (antibodi) pada pembawa pepejal, substrat enzim yang sepadan ditambah. Iaitu, hidrolisis pemangkin atau tindak balas dan warna REDOX.
Warna warna yang dihasilkannya adalah berkadar dengan jumlah antigen (antibodi) yang akan diukur. Produk berwarna ini boleh diperhatikan dengan mata kasar, mikroskop optik, mikroskop elektron, juga boleh diukur dengan spektrofotometer (alat label enzim). Kaedahnya mudah, mudah, cepat dan khusus.